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            Product display

            大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒

            • 型   號(hào):貨號(hào):SU-B30813
            • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
            • 所在地:上海市
            • 價(jià)       格:

            更新時(shí)間:2023-07-05    服務(wù)電話:13564766906

            簡(jiǎn)要描述:大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中大鼠褪黑素(MT)的含量。

            詳細(xì)介紹

            大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒

            l 本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本大鼠褪黑素MT)的含量。

            l 有效期:6個(gè)月

            l 保存條件:2-8℃

            l 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷


            實(shí)驗(yàn)原理

            試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠褪黑素(MT)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠褪黑素(MT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。


            樣本處理及要求

            1. 血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
            2. 血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
            3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

            4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

            注:標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。


            需要而未提供的試劑和器材

            • 酶標(biāo)儀(450nm)

            • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

            • 37℃恒溫箱

            • 蒸餾水或去離子水


            試劑盒組成


            名稱

            96孔配置

            48孔配置

            備注

            微孔酶標(biāo)板

            12孔×8條

            12孔×4條

            標(biāo)準(zhǔn)品

            0.3mL*6管

            0.3mL*6管

            樣本稀釋液

            6mL

            3mL

            檢測(cè)抗體-HRP

            10mL

            5mL

            20×洗滌緩沖液

            25mL

            15mL

            按說明書進(jìn)行稀釋

            底物A

            6mL

            3mL

            底物B

            6mL

            3mL

            終止液

            6mL

            3mL

            封板膜

            2張

            2張

            說明書

            1份

            1份

            自封袋

            1個(gè)

            1個(gè)

            大鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒

            1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

            2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。


            注意事項(xiàng)

            • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

            • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

            • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

            • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

            • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

            • 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

            • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

            • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

            • 不能使用過期產(chǎn)品。

            • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。


            試劑準(zhǔn)備

            試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

            20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。


            操作步驟

            1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

            2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

            3.  樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

            4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

            5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

            6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

            7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


            實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

            以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。


            試劑盒性能

            • 檢測(cè)范圍:2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

            • 靈敏度:低檢測(cè)濃度小于0.1 pg/mL。

            • 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

            • 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。


            說明

            由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。

            • 終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

            • 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

            • 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到*的檢測(cè)結(jié)果。

            • 本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

            • 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

            • 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。

            • 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。


             


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