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            恒遠告訴大家:影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法
            更新時間:2012-07-13 點擊次數(shù):1489

             

            影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

             ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。

            操作步驟
            可能原因
            解決辦法
            選擇試劑
            選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
            加   樣
            1過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);
            3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;
            2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間
            1.標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
            2.加樣后及時放入孵箱。
            3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
            4.如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
            5.標(biāo)本較多時,請分批操作。
            孵   育
            1.孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;
            2.孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。
            1.貼封片或加蓋;
            2.按說明步驟嚴格控制操作時間。
            洗   板
            1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
            2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。
            3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
            1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
            2.合理安排,或多用幾臺洗板機。
            顯   色
            1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
            2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
            1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
            2. 加樣時保持顯色劑不外流;
            3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
             終   止
            加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。
            加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
            讀   板
            讀板時板底不清潔。
            應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
            全過程
            1.整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;
            2.實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。

            在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
            上海恒遠生物科技有限公司主營產(chǎn)品/服務(wù):ELISA試劑盒,免疫組化試劑盒,放免試劑盒,標(biāo)準品,血清,抗體,培養(yǎng)基,生物試劑,基準試劑!
            ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專門針對人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對各種動物鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚的科研試劑。
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