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            免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題和解決方法
            更新時(shí)間:2016-04-12 點(diǎn)擊次數(shù):1950

            免疫組化實(shí)驗(yàn)的不順心是否讓你很苦惱,來看看恒遠(yuǎn)為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥??!

            染色過強(qiáng)

            原因解決方法
            抗體的濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng)

            降低抗體滴度(一般指濃縮性抗體) 抗體孵育時(shí)間:室溫1小時(shí)或4℃過ye

            孵育溫度過高,孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃
            DAB 顯色時(shí)間過長(zhǎng)或 DAB 濃度過高顯色時(shí)間不能超過5-10分鐘,以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

            非特異性背景染色

            原因解決方法
            操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5
            組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉,孵育時(shí)間延長(zhǎng)
            組織中含內(nèi)源性生物素正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
            血清蛋白封閉不充分延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間

            染色弱

            原因解決方法
            抗體濃度過低,孵育時(shí)間過短提高抗體濃度,孵育時(shí)間不能少于60分鐘
            試劑超過有效使用期及時(shí)更換試劑
            操作中,滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干,致使試劑稀釋每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥)
            室溫太低,低于15℃若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰箱過ye)
            蛋白封閉過度封閉時(shí)間不要超過10分鐘

            染色陰性

            原因解決方法
            操作步驟錯(cuò)誤重新試驗(yàn),設(shè)立陽性對(duì)照
            組織中無抗原設(shè)立陽性對(duì)照片,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤

            對(duì)實(shí)驗(yàn)有任何問題和建議,對(duì)公司產(chǎn)品有任何疑問的,都咨詢或在線咨詢,上海恒遠(yuǎn)竭誠(chéng)為您服務(wù)!

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