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            恒遠(yuǎn)十年資深技術(shù)與您分享“WB內(nèi)參抗體選擇原則”
            更新時(shí)間:2014-10-21 點(diǎn)擊次數(shù):2313

            內(nèi)參抗體種類很多,比如β-actinβ-tubunlin、GAPDH、Lamin B等,那么針對(duì)自己的實(shí)驗(yàn),我們?cè)撊绾芜x擇呢?下面恒遠(yuǎn)技術(shù)簡(jiǎn)單介紹下選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的原則:

            .樣本種屬來(lái)源:

            首先要考慮的就是實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)源于什么物種。

            1、哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本,通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin BHistone H3、Na,K atpase等。

            2、植物來(lái)源實(shí)驗(yàn)樣本,則可以選擇plant actin、Rubisco等。

            3、其他來(lái)源樣本研究較少,所以就應(yīng)該參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。

            .目的蛋白分子量:

            選擇內(nèi)參抗體時(shí),應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小。通常應(yīng)該保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量為45KD,此時(shí)不適宜選擇β-actin作為內(nèi)參,可以考慮選擇GAPDH或者β-tubulin作為內(nèi)參。

            .目的蛋白表達(dá)部位:

            就一般的蛋白檢測(cè)來(lái)說(shuō),β-actin、β-Tubulin抗體等就可以了,而針對(duì)于核蛋白的定量,特別是樣本蛋白就是核蛋白時(shí),選擇恰當(dāng)?shù)暮说鞍變?nèi)參則更能體現(xiàn)內(nèi)部參照的價(jià)值。常用的核內(nèi)參抗體有Lamin ALamin B、Histone H3,除此之外,其它常見的核蛋白內(nèi)參還有PCNA、K70、K80等,在一些文獻(xiàn)報(bào)道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Junc-Fos等都有使用。而對(duì)于膜蛋白檢測(cè),常用的內(nèi)參抗體為Na,K ATPase。對(duì)于線粒體蛋白的檢測(cè),常用VDAC1COX IV作為內(nèi)參抗體。

            以上幾條原則只是針對(duì)通常情況,但是需要注意的問(wèn)題是——內(nèi)參的選擇需要考慮實(shí)際的試驗(yàn)環(huán)境,比如某些細(xì)胞中,由于組織缺氧、糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致GAPDH的表達(dá)增高,不適合做內(nèi)參。比如在涉及細(xì)胞增殖相關(guān)試驗(yàn)中,c-Jun由于自身表達(dá)變化就不適合做內(nèi)參;而在凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí),TBP、Lamin等也不適合作為內(nèi)參。因此設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案的時(shí)候應(yīng)該考慮這些因素并查詢相應(yīng)文獻(xiàn),在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也應(yīng)該注意如果內(nèi)參表達(dá)出現(xiàn)異常,應(yīng)考慮這方面因素。

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