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            在同一條件下做WB實(shí)驗(yàn)為什么一張膜顯影,一張膜未顯影?
            更新時(shí)間:2014-09-01 點(diǎn)擊次數(shù):6037

            近期恒遠(yuǎn)經(jīng)常接到客戶的:同一條件下,除了測的指標(biāo)不一樣,為什么有張膜顯影,有張未顯影???

            上海恒遠(yuǎn)技術(shù)分析:在同一條件下,如果一張膜顯影,一張膜未顯影,可以逐一查找原因:

            1、你是否兩張膜上都設(shè)有陽性對(duì)照?如果有,一張膜有信號(hào),一張沒信號(hào),可能是操作過程中有問題(可能原因是(1)、你結(jié)合底物會(huì)不會(huì)有問題,即沒有充分結(jié)合好,或者結(jié)合時(shí)間太短,(2)、你要確定兩張膜都是用新的底物反應(yīng)液,(3)、就是沒有信號(hào)的膜會(huì)不會(huì)壓片時(shí)間太短,如果使用儀器掃片就不存在這種問題,)所以原因比較多,你只能逐一排查。

            2、如果沒有設(shè)對(duì)照,這個(gè)問題就更復(fù)雜,而且解決起來也不科學(xué)。同時(shí),要控制兩個(gè)膜條件*一樣是很困難的。即使你是同時(shí)做的兩個(gè),那一定有一個(gè)先上樣,一個(gè)后上樣,而且你跑膠的時(shí)候會(huì)發(fā)現(xiàn),兩塊膠上的條帶速度肯定是不一樣的,轉(zhuǎn)膜兩個(gè)膜放的位置也肯定不一樣,等等,也許這些小問題都不能導(dǎo)致你壓片不出條帶,我只是想說,兩個(gè)條件不可能*相同,western blot實(shí)驗(yàn)就是重復(fù)性比較差,所以一個(gè)出一個(gè)不出,這樣是正常的。

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