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            ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)問(wèn)題的詳解
            更新時(shí)間:2013-09-29 點(diǎn)擊次數(shù):1333

             1 質(zhì)控血清的使用

            衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清,可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時(shí),應(yīng)先混勻,未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開(kāi)展某項(xiàng)檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清,一般按3-6個(gè)月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清,在一批質(zhì)控血清將用完之前,需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定,較長(zhǎng)期內(nèi)效價(jià)不變,其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近,這樣才能有效地起到監(jiān)測(cè)作用。

            2 臨界值質(zhì)控血清
            質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值,一般定在正常值與異常值交界點(diǎn)上,定性測(cè)定時(shí)處于弱陽(yáng)性水平,稱為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定,應(yīng)按臨床要求,為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。 
            臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品和陰性對(duì)照品以外的第三個(gè)對(duì)照品,它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平,確保弱陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本不漏檢。
            3 質(zhì)控血清的制備
            每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的條件,選用臨床中心提供的質(zhì)控血清,或按以下方法自己制備本室使用的質(zhì)控血清(以乙肝質(zhì)控血清為例)。
            1) 收集新鮮的無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)細(xì)菌污染的陽(yáng)性血清。
            2) 56℃加熱10小時(shí)來(lái)活。
            3) 離心或過(guò)濾除去沉淀。
            4) 用10%的小牛血清或正常人血清(PBS緩沖液)將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好,因其成份更接近于檢測(cè)標(biāo)本。
            5) 抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿,封口,20℃保存?zhèn)溆?。不可反?fù)凍融。
            被檢物要求檢出的水平常被認(rèn)為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗(yàn)還有其它要求,則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。
            6) 標(biāo)定含量。20-30次測(cè)定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值,并與已知定值血清對(duì)比測(cè)定。

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