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            上海恒遠告訴大家:關(guān)于白介素4的不同檢測方法
            更新時間:2012-08-14 點擊次數(shù):2545

             

              1、IL-4與LPS共刺激B細胞分泌IgG1和IgE的測定小鼠B淋巴細胞在LPS刺激下首先分泌IgM和IgG3、IgG2b。當IL-4作用于LPS刺激的B細胞時,IgM、ISC3、IgG2b合成產(chǎn)物明顯減少,而IgE、IgCl合成產(chǎn)物顯著地增加。在細胞培養(yǎng)5-6d后,收獲上清,通過對IgE和IgCl測定,間接了解IL-4的含量。IgE測定用放射免疫法;IgCl含量測定可采用雙抗體ELISA夾心法。
             
                2、依賴株CT.4S的增殖試驗  CT.4S細胞是依賴于IL-4,對IL-2低反應(yīng)的CTLL變異株,其增殖反應(yīng)(用3H-TdR摻人量來反映)與IL-4呈劑量相關(guān)。操作步驟基本同前述用CTLL-2測IL-2,但應(yīng)設(shè)置rIL-2對照,以進一步排除IL-2對結(jié)果的影響。
             
                CT.4S細胞是一類粘附細胞,在收獲細胞時,可先用0.25%胰酶消化。CT.4S細胞雖是IL4依賴株,但待測樣品中IL-2含量過高(>100U/mL)或IL4含量過高,均影響IL-4測定。因此在進行大批試驗時,對待測樣品應(yīng)進行預(yù)測,以便將樣品稀釋至該法zui敏感的檢測范圍之內(nèi)。
             
                3、轉(zhuǎn)染人IL-4受體的CTLL-2細胞測定人IL-4  由于IL-4的種屬特異性,人、鼠之間沒有交叉反應(yīng),故可將人IL-4受體基因轉(zhuǎn)染到IL-2依賴株CTLL-2細胞系中,使這種細胞同時表達小鼠IL-2受體和人IL-4受體,因此,可常規(guī)維持在含IL-2的培養(yǎng)基中,并可用于檢則重組人IL-4或封閉IL-2活性后的混合樣品中的人IL-4活性。
             
                4、雙抗體夾心ELISA法檢測誘生上清IL-4含量 以免抗IL-4多克隆抗體包被反應(yīng)板,以酶標抗IL-4McAb進行夾心ELISA法。與標準晶對比,可測出誘生上清中的IL-4含量,操作步驟同常規(guī)ELISA。

             

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