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            恒遠生物|微生物染色方法
            更新時間:2024-02-26 點擊次數(shù):357

              微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色,但不能鑒別微生物。復染色法是用兩種或兩種以上染料,有協(xié)助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法,此外還有鑒別細胞各部分結(jié)構(gòu)的(如芽胞、鞭毛、細胞核等)特殊染色法。食品微生物檢驗中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。


            1、單染色法


              用一種染色劑對涂片進行染色,簡便易行,適于進行微生物的形態(tài)觀察。在一般情況下,細菌菌體多帶負電荷,易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。因此,常用堿性染料進行單染色,如美蘭、孔雀綠、堿性復紅、結(jié)晶紫和中性紅等。若使用酸性染料,多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時,必須降低染液的PH值,使其呈現(xiàn)強酸性(低于細菌菌體等電點),讓菌體帶正電荷,才易于被酸性染料染色。


            單染色一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗和干燥五個步驟。


            染色結(jié)果依染料不同而不同:


            石碳酸復紅染色液:著色快,時間短,菌體呈紅色。  


            美蘭染色液:著色慢,時間長,效果清晰,菌體呈蘭色。


            草酸銨結(jié)晶染色液:染色迅速,著色深,菌體呈紫色。


            2、革蘭氏染色法


            革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。


                   細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G-)。為觀察方便,脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進行復染。陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌,以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應;弧菌,螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)負反應。

              革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質(zhì)上有很多差別,染色反應不一樣?,F(xiàn)在一般認為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復合物,它與碘和結(jié)晶紫的復合物結(jié)合很牢,不易脫色,陰性菌復合物結(jié)合程度底,吸附染料差,易脫色,這是染色反應的主要依據(jù)。

              另外,陽性菌菌體等電點較陰性菌為低,在相同PH條件下進行染色,陽性菌吸附堿性染料很多,因此不易脫去,陰性菌則相反。所以染色時的條件要嚴格控制。例如,在強堿的條件下進行染色,兩類菌吸附堿性染料都多,都可呈正反應;PH很低時,則可都呈負反應。此外,兩類菌的細胞壁等對結(jié)晶紫—碘復合物的通透性也不一致,陽性菌透性小,故不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色。所以脫色時間,脫色方法也應嚴格控制。


            革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:


            1)涂片固定。


            2)草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。


            3)自來水沖洗。


            4)加碘液覆蓋涂面染1分鐘。


            5)水洗,用吸水紙吸去水分。


            6)加95%酒精數(shù)滴,并輕輕搖動進行脫色,30秒后水洗,吸去水分。


            7)蕃紅梁色液(?。┤?0秒鐘后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。


            染色的結(jié)果,革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。


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